禽流感是由禽流感病毒 （avian influenzavirus，AIV）引起的高度接触性传染病 [1] 。H5 和H7 亚型的某些毒株可以造成禽类很高的发病率和死亡率，被称为高致病性禽流感病毒（HPAIV）[2] 。目前，已有禽流感病毒 H5N1、H5N2、H5N6、H9N2、H7N7、H10N7 和 H10N8 等感染人的报道 [3] 。其中，H7N9 亚型流感是 A 型流感中的一种，2013 年 3 月 31 日首先在中国上海和安徽发现了 3 例人感染 H7N9 流感病例[4]，此后该病迅速在中国大陆及港澳台地区蔓延，并呈现季节性流行趋势。2016 年年底，廖明等首次分离到 H7N9 亚型流感的变异株，变异株在家禽中表现为高致病性[5] 。为了遏制H7N9 流感疫情，农业部决定从 2017 年 7 月开始，在广东、广西两省（区）进行重组禽流感（H5+H7）二价灭活疫苗免疫试点。为掌握该疫苗对鸡的免疫效果，分别在东莞选取 5 个规模养殖场和 14 个镇（街）散养鸡，免疫重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗后 21 天进行监测，现将结果报告如下。
1、材料与方法
1.1 样品采集
共采集鸡血清 862 份，其中鸡血清 258 份分别采自东莞市 2 个种鸡养殖场、2 个肉鸡养殖场；散养鸡血清 604 份，采自东莞市 14 个镇（街）散养鸡。免疫重组禽流感（H5+H7）二价灭活疫苗(H5N1 Re-8 株 +H7N9 H7-Re1 株，批号为 20180603) 21 天后，以翅静脉采血 2 mL，以3 500 r/min 离心 15 min 分离获得待检血清，-20℃保存，备检。
1.2 试剂与方法
1.2.1 1%鸡红细胞悬液
采集实验室饲养的 3 只禽流感和新城疫非免疫的健康公鸡的血液与阿氏液等体积混合，用 pH 值 7.2 的 0.01 mol/L PBS 液洗涤 3 次，每次以 1 000 r/min 离心 10 min，洗涤后用 PBS 液配成体积分数 1%鸡红细胞悬液，4℃保存备用。
1.2.2 禽流感抗原和阳性血清
H5 亚型禽流感抗原（Re-8）株和阳性血清、H7N9 亚型禽流感抗原株和阳性血清，为哈尔滨维科生物科技有限公司产品。
1.2.3 主要耗材和仪器
96 孔“V”型反应板、离心机、八道移液器、微量震荡器。
1.2.4 方法
按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)规定的血凝与血凝抑制方法操作。以完全抑制 4 单位抗原的血清最高稀释倍数作为 HI 的滴度。HI 效价小于或等于 31og2判阴性，HI 效价大于或等于 41og2 判阳性,判定为抗体合格。
2、结果与分析
2.1 H5 亚型禽流感病毒抗体检测结果
共检测鸡血清 862 份，H5 亚型禽流感病毒（Re-8 株） 抗体阳性 683 份，抗体阳性率79.23%，其中种鸡场抗体阳性率最高，其次为肉鸡场，散养鸡最低，详细结果见表 1。
2.2 H7N9 亚型禽流感病毒抗体检测结果
共检测鸡血清 862 份，H7N9 亚型禽流感病毒抗体阳性 553 份，抗体阳性率 64.15%，其中种鸡场抗体阳性率最高，其次为肉鸡场，散养鸡最低，详细结果见表 2。
3、讨论
3.1 禽流感疫苗对于我国禽流感的防控起着至关重要的作用，为了遏制 H7N9 亚型禽流感在家禽中流行，2017 年 7 月，农业部率先在广东和广西两省（区）试点免疫。根据此次免疫疫苗后的监测结果，二价疫苗在鸡群中能够产生比较好的免疫应答，种鸡场、肉鸡场和散养鸡免疫二价疫苗后，H5 亚型禽流感病毒（Re-8 株）抗体水平较高，均能达到农业部免疫规范要求的 70%以上。H7N9 亚型流感病毒免疫抗体水平稍差一点，种鸡场和肉鸡场能达农业部免疫规范要求的 70%以上，但散养鸡的免疫合格率只有 55.79%，达不到要求，还需要进行二次免疫。
3.2 此次免疫效果的评价是选取了 2 个种鸡场、2 个肉鸡场和 14 个镇（街）的散养鸡，每批抽样采血的都是随机抽取的，不排除存在鸡个体差异及其他因素在实验过程中造成的误差，因此实验数据都只是实验评估数据，但本法是基层工作中常用的免疫评估方法，通过本次实验可以得出，此种免疫评估方法在基层实际工作中具有一定的科学性和可行性，能够满足基层免疫效果评价的要求。
3.3 造成疫苗免疫失败因素有较多，包括免疫的程序、动物品种的差异、家禽中免疫抑制疾病的存在、动物营养状况、接种疫苗的应激、疫苗的质量、疫苗接种的方式、疫苗接种的剂量、疫苗的冷链配送和免疫接种前后使用了免疫抑制性药物等。
3.4 种鸡场和肉鸡场为规模场，免疫程序比较规范，根据了解，在免疫二价疫苗以前已经进行H5 亚型禽流感疫苗的免疫。散养鸡一般来自三鸟批发市场或者农贸市场，溯源跟踪一般都是来自外市的大型家禽规模养殖场，在出栏前已有一定的 H5 亚型禽流感疫苗免疫基础，在购买回来育肥后免疫 1 次，H5 亚型禽流感病毒抗体基本上可以达到合格水平。散养鸡在养殖场饲养时仍未开展 H7N9 亚型流感疫苗的免疫，进入市场流通环节和散养阶段时，从饲养环境、免疫规范、个体机能等方面未达到规模化养殖的标准，仅免疫 1 次未能产生良好的被动免疫效果，也与该疫苗属于灭活苗有关，灭活疫苗通常要经过 2 次以上免疫才能诱导机体形成较好的免疫应答机制，所以散养鸡 H7N9 亚型流感病毒抗体水平较低。
参考文献
[1] Y.M.Saif，H.J.Barnes，J.R.Glisson 等. 禽病学[M]. 第 11 版. 北京: 中国农业出版社，2005：147-166.
[2]张毅，王幼明，王芳，等.我国禽流感研究进展及成就[J].微生物学通报，2014，41（3）：497-503.
[3]黄珍霞，廖晓东.H7N9 亚型禽流感综合防控技术现状分析与对策研究[J].中国卫生事业管理,2013, （12）：949-952.
[4]Gao R,Cao B, Hu Y, et al. Human infection with a novel avian-origin influenza A (H7N9) virus[J]．N Engl J Med，2013，368(20):1888-1897.
[5]李冰.茂名市家禽 H7N9 流行现状及防控对策[J].广东畜牧兽医科技,2017,42(5):17-19.
作者：周柱辉1，陈松春2，潘杰3，黄兴荣1，王自强3，张险朋3*（1 广东省东莞市横沥镇农业技术服务中心，广东东莞 523460；2 广东省东莞市常平镇农业技术服务中心，广东东莞 523070；3 广东省东莞市动物疫病预防控制中心，广东东莞 523086）
第一作者：周柱辉（1970-），男，广东东莞人，兽医师，从事动物疫病防控工作
通讯作者：张险朋（1979-），男，广东五华人，高级兽医师，从事动物疫病和人畜共患病防控工作邮箱：xian.peng@163.com
