禽流感是由 A 型流感病毒引起禽类的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多种症状的传染病。免疫禽流感疫苗是防控禽流感的有效方法，在肉鸡生产中，依照程序按时按量进行疫苗注射，关系到肉鸡能否健康生长，禽流感疫苗均为油佐剂灭活苗，常采用皮下或胸肌肉注射。但由于油佐剂疫苗注射后吸收缓慢，在注射部位扩散并形成残留，影响肉鸡品质 [1][2] 。本试验主要对禽流感疫苗注射采用不同剂量及不同注射部位进行对照，以便为生产实际中疫苗注射提供一些参考，从而间接提高肉鸡肉质水平。
1、材料与方法
1.1 试验材料
试验动物：选取 10 日龄三黄胡须肉鸡，共计 1 万只，由博罗县石坝镇某养殖公司养户黄某鸡场提供，并由其鸡场技术员进行疫苗注射。
禽流感疫苗：哈尔滨维科生物技术开发公司生产的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5Re-8 + H7Re-1），批号：兽药临字 080012297。
1.2 试验设计
将 1 万只 10 日龄肉鸡进行分栏舍饲养，分为 A、B、C 3 栏；其中 A 栏为试验组（按照疫苗生产厂家要求剂量 0.5 mL 注射、分左右胸肌交替注射），B 栏为试验组（按照剂量 0.3 mL 注射、并统一注射右胸肌），C 栏为养殖企业常规注射对照组（按照疫苗生产厂家要求剂量 0.5 mL 注射，并统一注射右胸肌）。（详见表 1）
雏鸡禽流感母源抗体至 28 日龄时，已趋于消失 [3] ,所以可不考虑禽流感母源抗体的影响。
在 36 天龄时注射了青岛易邦生物工程有限公司生产的禽流感（H5）三联灭活苗，在注苗后 40 天疫苗可完全吸收，肉眼看不出对鸡肉品质有影响 [2] ，所以可忽略此次注苗对试验鸡 120 天龄时疫苗残留的影响。
在 53 天龄及 82 天龄采用胸肌肉注射禽流感疫苗，每次注射免疫后25 天左右采集血清样品，检测免疫抗体水平（HI）滴度，为试验观察提供数据参考。
3 个栏舍饲养条件相同，由同一技术员注射疫苗。
1.3 试验检测
在 82 天龄时每组抽样 10 只，采集血清样品，监测 3 组肉鸡禽流感免疫抗体水平（HI）滴度是否达到生产要求水平。（详见表 2）
在 104 天龄时每组抽样 10 只，采集血清样品，监测 3 组肉鸡禽流感免疫抗体水平（HI）滴度是否达到生产要求水平。（详见表 3）
120 天龄时，在博罗县石坝镇某养殖公司养户黄某鸡场进行解剖，肉眼观察注射部位禽流感疫苗的吸收和残留情况，以毫米尺（精度1mm）测量残留面积范围，并拍照、记录数据。（详见下图）
1.4 饲养管理
正式试验于 2017 年 6 月 26 日至 2017 年10 月 13 日 9（10～120 日龄）共计 111 天，在博罗县石坝镇某养殖公司养户黄某鸡场进行，试验肉鸡饲养条件及免疫程序按养殖企业规定。
1.5 数据处理
采用 EXCLE 进行一般处理后再用 SPSS 进行显著性检验
2、结果与分析
2.1 禽流感疫苗免疫抗体水平对比
2.1.1 试验鸡在 82 天龄时采集血清样品，检测在 53 天龄时注射的禽流感疫苗抗体水平；分析对比表 2 血凝或间接血凝抗体水平结果，3 组抗体水平合格率都达到 100%。
A 组（按照疫苗生产厂家要求剂量 0.5 mL注射、分左右胸肌交替注射）和 C 组（按照疫苗生产厂家要求剂量 0.5 mL 注射，并统一注射右胸肌）对比。在免疫剂量相同而注射部位有差异情况的结果：①H5Re-8 毒株抗体水平，A 组 10份样品血凝滴度分布和 C 组 10 份样品血凝滴度分布。两组数据进行差异性分析，结果为 P＜0.01.差异极显著。
②H7Re-1 毒株抗体水平，A 组 10 份样品 血凝滴度分布和 C 组 10 份样品血凝滴度分 布。两组数据进行差异性分析，结果为 P＜0.01. 差异极显著。
B 组（按照剂量 0.3 mL 注射、分左右胸肌交替注射）和 C 组（按照疫苗生产厂家要求剂量0.5 mL 注射，并统一注射右胸肌）对比。在注射部位相同而免疫剂量有差异情况的结果：①H5Re-8 毒株抗体水平，B 组 10 份样品血凝滴度分布和 C 组 10 份样品血凝滴度分布。两组数据进行差异性分析，结果为 P＜0.01.差异极显著。
②H7Re-1 毒株抗体水平，B 组 10 份样品血凝滴度分布和 C 组 10 份样品血凝滴度分布。两组数据进行差异性分析，结果为 P＞0.05.差异不显著。
2.1.2 试验鸡在 104 天龄时采集血清样品，检测在 82 天龄时注射的禽流感疫苗抗体水平；分析对比表 3 血凝或间接血凝抗体水平结果，3组抗体水平合格率都达到 100%。
A 组（按照疫苗生产厂家要求剂量 0.5 mL注射、分左右胸肌交替注射）和 C 组（按照疫苗生产厂家要求剂量 0.5 mL 注射，并统一注射右胸肌）对比。在免疫剂量相同而注射部位有差异情况的结果：①H5Re-8 毒株抗体水平，A 组 10份样品血凝滴度分布和 C 组 10 份样品血凝滴度分布。两组数据进行差异性分析，结果为 P＜0.01.差异极显著。
②、H7Re-1 毒株抗体水平，A 组 10 份样品血凝滴度分布和 C 组 10 份样品血凝滴度分布。两组数据进行差异性分析，结果为 P＞0.05.差异不显著。
B 组（按照剂量 0.3mL 注射、分左右胸肌交替注射）和 C 组（按照疫苗生产厂家要求剂量0.5 mL 注射，并统一注射右胸肌）对比。在注射部位相同而免疫剂量有差异情况的结果：①H5Re-8 毒株抗体水平，B 组 10 份样品血凝滴度分布和 C 组 10 份样品血凝滴度分布。两组数据进行差异性分析，结果为 P＞0.05.差异不显著。
②H7Re-1 毒株抗体水平，B 组 10 份样品血凝滴度分布和 C 组 10 份样品血凝滴度分布。两组数据进行差异性分析，结果为 P＞0.05.差异不显著。
2.2 禽流感疫苗残留情况分析
试验鸡在 120 天龄时，每组随机抽样 3 只屠宰、剥检，对注射部位的疫苗吸收和残留情况进行肉眼观察、拍照（详见附件图片），并测量残留物，结果如下：
A 组 3 个样品中，有一个样品（A3）没有出现疫苗残留物，其他两个样品（A1、A2）均有疫苗残留物，A1 样品疫苗残留物表现为浅黄色豆状（剪开包裹外膜可见黄色油状物流出）、小米粒分散状及干酪样物状，呈现菱形分布，面积约18 cm2 ；A2 样品疫苗残留物包裹在肌肉里层，解剥外翻后可见，表现为浅黄色条状物，剪开成凝固态。（详见图 1）
B 组 3 个样品的胸肌外膜均没有明显的疫苗残留物，但解剥外翻肌肉里层检查，可以发现有个别浅黄色小米粒状的疫苗残留物，呈凝固态。（详见图 2）
C 组 3 个样品均有明显的疫苗残留物，表现为浅黄色干酪状及豆状（剪开包裹外膜可见黄色油状物流出），分布密集，呈现出带状分布，长度在 4 cm 左右。（详见图 3）
3、结果讨论
疫苗在注射部位残留主要与矿物油佐剂质量如烃类成分、黏度、相对密度等密切相关，还可能因为注射剂量超量、多次同一部位注射等影响到疫苗的吸收分解而造成肉鸡体内油苗残留[4][5] 。
本试验中，在试验肉鸡 82 天龄和 104 天龄时抽样血清检测抗体水平合格率均达到 100%，其中试验组 A 组与对照组 C 组抗体水平滴度分布情况具有显著差异，而试验组 B 组与对照组 C 组抗体水平滴度分布情况无显著差异；在试验肉鸡 120 天龄时屠宰解剥检查胸肌肉疫苗残留物情况看，试验组（A、B 组）疫苗残留物情况均少于对照组（C 组），且 B 组疫苗残留物情况较好。
肉鸡肌肉注射禽流感油乳剂疫苗对鸡肉品质的影响客观存在，建议对肉鸡，尤其是快大肉鸡应避免胸肌注射禽流感油乳苗，或在注苗 30天后才可以出售[2] ，同时可以根据不同肉鸡品种，尤其是个体较小的优质地方品种鸡，降低疫苗注射剂量，采用不同部位交替注射的方法，提高鸡体对疫苗的吸收，减少疫苗残留物。
参考文献
[1] 刘亮，唐善虎，杨榕生.采用 GC-MS 法检测肉鸡体中矿物油残留[J].中国动物检疫，2009，26（5）：44-46.
[2] 顾祥国，江裕吉，吴永兵，等.肉禽肌注禽流感疫苗后的吸收情况观察[J].中国家禽，2005，27（016）：26.
[3] 吴庭才，张春杰，郭向鹏.禽流感母源抗体消长规律和免疫保护抗体临界值的测定[J]。洛阳农业高等专科学校学报，2002，22（4）：243-244.
[4] 江涛，方博，刘政.禽流感疫苗在肉鸡注射部位的残留试验 [J]. 中国家禽，2011，33（20）：59-60.
[5]樊志红，庄平稳，曾宪军.不同部位注射禽流感疫苗的免疫效果及屠宰品质研究[J].中国家禽，2009，31（5）：47-48.
作者：黄荣兴1 ，林国经1 ，廖育辉1 ，黄东宣2（1 广东省博罗县动物疫病预防控制中心，广 东博罗516100；2 广东省博罗县畜牧兽医局 ， 广东博罗516100）
责任编辑：李斐
