在国际动物卫生法典中，禽流感和高致病性禽流感同属法定报告动物疫病 [1] 。目前高致病性禽流感和新城疫在我国仍是危害养鸡业的主要传染病，加上市场流通日益活跃，给养鸡业带来了严峻的考验。为了减少防疫人员的工作量，提高工作效率，减少由于疫苗免疫带来的应激，选择合适的疫苗，采取合理的免疫程序以促使这2 种疾病的免疫抗体水平能够长时间维持在较高的水平显得尤为重要。实际生产中常使用的新城疫Ⅰ系疫苗（国家现已禁用）毒力较强，对雏鸡有一定的致病性，且该苗不能用于产蛋鸡，可引起产蛋量大幅下降。新城疫 CS 株疫苗，免疫效果与新城疫Ⅰ系苗相似，但不能用于初生雏鸡和产蛋鸡。新城疫Ⅳ系疫苗（Lasota 株）毒力低，可在雏鸡、青年鸡和产蛋鸡上使用，但维持的时间较短 [2] 。新城疫油乳剂灭活苗可用于雏鸡预防新城疫，且不受母源抗体的干扰，能长时间维持较高抗体水平，使产蛋鸡安全地度过整个产蛋期，抵抗新城疫强毒的侵袭 [3] ，但价格昂贵。为获得上述两病的免疫效果，同时减少基层防疫人员的工作量，本实验将禽流感灭活苗和新城疫疫苗同时双针接种雏鸡，新城疫使用新城疫Ⅳ系苗首免，用新城疫油乳剂灭活疫苗二免，以了解新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感灭活疫苗同时免疫的效果。结果显示，试验中采取的免疫程序能使 2 种疾病的免疫抗体均能长时间维持在较高的水平，可以此来制定出符合本地散养鸡的免疫程序。
1、试验材料和方法
1.1 试验疫苗
重组禽流感 H5 亚型三价灭活疫苗（Re-6 株 +Re-7 株 +Re-8株）：郑州乾元浩股份有限公司生产，批号 2016067；新城疫Ⅳ系疫苗（LaSota 株）：广西丽源生产，批号 20160424；新城疫油乳剂灭活疫苗：扬州威克生产，批号 1604039。
疫苗按使用说明书要求的条件进行保存、运输和使用。
1.2 试验鸡的选择
随机选择本市新集镇 4 群相似日龄农户捉养的雏鸡，分为 A、B、C 和 D 组。
1.3 主要试验仪器和检测抗原
采血器、微量加样器、振荡器、96 孔 V 型一次性反应板；禽流感抗原 H5 亚型 RE-6 株（2016008）、H5 亚型 RE-7 株（2016017）、H5 亚型 RE-8 株（2016006），哈尔滨维科生产；禽流感 H5 亚型 RE-6 株 HI 试验阳性血清（2016002）、禽流感 H5 亚型 RE-7 株 HI 试验阳性血清（2016001）、禽流感 H5 亚型 RE-8 株 HI试验阳性血清（2016005），哈尔滨维科生产；禽流感 H5 亚型阴性血清（2017001），哈尔滨维科生产；鸡新城疫血凝抑制抗原（20160401）、新城疫阳性血清 （20160904）和新城疫阴性血清（20160701），均由青岛易邦生物工程有限公司生产。
1.4 免疫试验设计
A、B、C 和 D 组的鸡分别于 15 日龄采集血样，用血凝抑制（HI）试验检测鸡的禽流感和新城疫母源抗体，结果在 0～2log2 之间。A、B、C 组在 36 日龄左右进行禽流感和鸡新城疫Ⅳ系疫苗（LaSota 株）双针免疫，剂量为禽流感灭活疫苗 0.5 mL/ 羽肌肉注射，鸡新城Ⅳ系疫苗（LaSo-ta 株）2 羽份 / 羽滴鼻；间隔 3～4 周天后再进行禽流感和鸡新城疫油乳剂灭活疫苗双针免疫，剂量为禽流感灭活疫苗 1 mL/ 羽肌肉注射，鸡新城疫油乳剂灭活疫苗 1 mL/ 羽肌肉注射。D组仅使用禽流感和鸡新城疫油乳剂灭活疫苗免疫双针免疫 1 次，剂量为禽流感灭活疫苗0.5mL/ 羽肌肉注射，鸡新城疫油乳剂灭活疫苗0.5 mL/ 羽肌肉注射。具体分组和免疫情况见表1。
1.4.1 免疫接种试验
在首次接种后的第 1 个月、2 个月、3 个月、4 个月、5 个月和 6 个月分别采集血液，用 HI 试验检测其免疫抗体效价。每次采集的血样及时分离血清，保存在冰柜 -20℃冷冻待检。
1.4.2 免疫反应临床观察
在接种疫苗后注意观察鸡的临床状态，并做记录。
2 试验结果与分析
A、B、C 组雏鸡在 36 日龄左右同时进行禽流感和鸡新城疫Ⅳ系苗首免，在首免 3～4 周后同时进行禽流感灭活苗和新城疫油乳剂灭活苗二免；D 组雏鸡仅在 51 日龄同时进行一次禽流感灭活苗和新城疫油乳剂灭活苗免疫。首免后在 30 天、60 天、90 天、120 天和 180 天分别采集血液，分别检测禽流感和新城疫的血凝抑制价。
2.1 血样禽流感血凝抑制价
免疫 30 天时，A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%，抗体滴度都在 7 log2 以上，D组血样的禽流感免疫合格率为 100%，抗体滴度都在 7 log2 以上；免疫 60 天，A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%，且 70%的血样抗体滴度在 10 log2 ，D 组血样的禽流感免疫合格率为 100%，且 30%的血样抗体滴度在 10 log2 ；免疫 90 天时，A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%，D 组血样的禽流感免疫合格率为100%；免疫 120 天时，A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%，抗体滴度在 6 log2 以上，D 组血样的禽流感免疫合格率为 100%，D组血样的抗体滴度在 4～6 log2 ；免疫 150 天时，A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%，且抗体滴度仍然在 6 log2 以上，D 组血样的禽流感免疫合格率为 40%，此时已缺乏足够的保护力；免疫 180 天时，A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%，且抗体滴度在 4～6 log2 ，D组血样的禽流感免疫保护率为小于 40%。结果如表 2。试验结果显示：禽流感灭活苗免疫在仅免疫 1 次，剂量 0.5 mL/ 羽时，能提供有效的免疫保护达 4 个月，需要在第 5 个月加强免疫。分析其原因，可能是由于油乳剂灭活疫苗的黏滞性，实际接种剂量 0.5 mL/ 羽时，有效剂量达不到要求，所以实际防疫过程中建议剂量视情况略增至 0.7～1 mL / 羽，可提供至少 6 个月的有效免疫保护，达到预期效果。
2.2 血样新城疫血凝抑制价
免疫 30 天时，A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为 0、100%、20%，D 组血样的新城疫免疫合格率为 90%；免疫 60 天，A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为 100%，且血样抗体滴度均为 10 log2 ，D 组血样的新城疫免疫合格率为 100%，且血样抗体滴度在 6 log2 以上；免疫90 天时，A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为 100%，D 组血样的新城疫免疫合格率为100%；免疫 120 天时，A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为 100%，抗体滴度仍然在 7 log2以上，D 组血样的新城疫免疫合格率为 100%，D 组血样的抗体滴度在 4～6 log2 ；免疫 150 天时，A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为100%，且抗体滴度仍然在 7 log2 以上，D 组血样的新城疫免疫合格率为 80%；免疫 180 天时，A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为 100%，且抗体滴度在 6 log2 以上，D 组血样的新城疫免疫保护率为 60%。结果如表 2。试验结果显示：新城疫的免疫仅适用新城疫灭活疫苗免疫 1次，剂量为 0.5 mL/ 羽，可提供有效的免疫保护达 5 个月；在使用新城疫Ⅳ系疫苗（LaSota 株）首免，剂量 2 羽份 / 羽，使用新城疫油乳剂灭活疫苗二免，剂量为 1 mL/ 羽，可提供有效的免疫保护至少达 6 个月。
根据以上试验结果，在秋季散养户集中防疫时对雏鸡实施禽流感免疫时，选择首免剂量为 0.5 mL/ 羽，同时进行新城疫Ⅳ系疫苗（LaSo-ta 株）首免，剂量为 2 羽份 / 羽，3～4 周后进行禽流感二免，剂量为 1 mL/ 羽；同时使用新城疫油乳剂灭活疫苗二免，剂量为 1 mL/ 羽。成年鸡实施禽流感免疫首免剂量为 1 mL/ 羽，同时进行新城疫油乳剂灭活疫苗免疫 0.7 mL/ 羽。在免疫 21 天后，进行免疫抗体监测，结果均能达到符合农业部要求的禽群抗体合格率。对于商品蛋鸡实施 14 日龄首次免疫禽流感灭活疫苗加新城疫油乳剂灭活疫苗 0.5 mL/ 羽，间隔 3～4周后再用禽流感灭活疫苗加新城疫油乳剂灭活苗进行二免，剂量 1 mL/ 羽，110 日龄用禽流感灭活疫苗加新城疫油乳剂灭活疫苗进行加强免，剂量 1 mL/ 羽，可为产蛋期提供有效的抗体保护。
通过这样的免疫程序，既能减少防疫员对面广量大散养家禽的防疫工作量，又可达到散养鸡的禽流感和新城疫的免疫效果，还能减少因免疫接种带来的禽群的应激反应等问题，提高了养殖者的经济效益，达到了事半功倍的效果。
参考文献
[1] 甘孟侯.中国禽病学[M].北京：中国农业出版社，1999.
[2] 杨增岐，赵余放，王云峰，等.鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的免疫效力试验[J].中国畜禽传染病,1997,(06).
[3] 秦卓明，徐怀英，刘玉山，等.疫苗免疫压力下新城疫病毒的动态演化 [J]. 中国兽药杂志，2013，47（2）：1-6.
[4] 姚春峰，刘文博，刘秀梵，等.新城疫病毒分离株的生物学特性鉴定及 F 蛋白基因序列分析[J].病毒学报，2009，25（2）：117-124.
作者：许静1周歌1邵向群1曹志全1彭园1糜晓霞1钱海燕2陈林佳2陆红霞3(1.江苏省仪征市畜牧兽医站，江苏仪征211400；2.江苏省仪征市新集镇畜牧兽医站，i江苏仪征211403 3.江苏省仪征市青山镇畜牧兽医站，江苏仪征211417)
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